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口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
中文名稱:口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競(jìng)爭(zhēng)ELISA(C-ELISA)抗體檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Competitive ELISA Kit for Detecting Antibody of Foot and Mouth Disease Virus type O
【簡(jiǎn)介】
口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、熱性高度接觸性傳染病,主要侵害偶蹄獸,一旦發(fā)病,將會(huì)引起嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。FMDV屬于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒屬,目前已知共有7中血清型,即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亞洲1型。
FMDV感染或免疫后,產(chǎn)生抗體的主要中和表位在VP1蛋白,本試劑盒基于VP1蛋白,采用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(C-ELISA),配備全套診斷試劑和材料,可用于檢測(cè)豬、牛、羊等動(dòng)物血清或血漿中的O型口蹄疫病毒(FMDV-O)抗體,適用于動(dòng)物疫苗免疫抗體的定性檢測(cè)及動(dòng)物群體抗FMDV-O感染風(fēng)險(xiǎn)能力的評(píng)估。試劑盒具有敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便快捷的特點(diǎn)。
【檢測(cè)原理】
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法,在酶標(biāo)板上預(yù)先包被FMDV-O VP1重組蛋白作抗原,以針對(duì)VP1蛋白的表位型特異單抗作中和競(jìng)爭(zhēng)抗體(即酶標(biāo)記物)。實(shí)驗(yàn)時(shí),加入待檢血清和單抗酶標(biāo)記物,則待檢血清種等FMDV-O特異性抗體與酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被在酶標(biāo)板上的FMDV-O VP1重組蛋白。通過洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分,加入底物顯色。用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)物的OD值,判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
【試劑盒組分】
序號(hào) | 組分名稱 | 數(shù)量 | 標(biāo)識(shí) |
1 | FMDV-O 抗原包被板 | 96T×2 | 鋁箔袋 |
2 | FMDV-O 酶標(biāo)記物 | 12 mL | 黃色帽 |
3 | FMDV-O 陽性對(duì)照血清 | 1.5 mL | 紅色帽 |
4 | FMDV-O 陰性對(duì)照血清 | 1.5 mL | 綠色帽 |
5 | 樣本稀釋液 | 12 mL | 透明帽 |
6 | 10×濃縮洗滌液 | 50 mL | 白色帽 |
7 | 顯色劑 | 12 mL×2 | 橙色帽 |
8 | 終止液 | 12 mL | 藍(lán)色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 | — |
10 | 說明書 | 1份 | — |
【樣本要求】
盡量使用新鮮采集的血清樣品;不能用于檢測(cè)嚴(yán)重污染或嚴(yán)重溶血的樣品;如果血清樣本渾濁,需離心后取上清進(jìn)行檢測(cè);檢測(cè)樣品可在2~8℃保存5天,長(zhǎng)時(shí)間保存需要轉(zhuǎn)移至-20℃或更低溫環(huán)境中。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒所有組分在使用前取出,置恒溫箱(25±3℃)中至少30 min,恢復(fù)至室溫。
2.配制洗滌液:將試劑盒提供的濃縮洗滌液用去離子水稀釋10倍(如:10 mL 10×濃縮洗滌液+90 mL去離子水)。
【操作方法】
1.加樣:按照“微孔板加樣位置示例圖"向抗原包被板樣品孔內(nèi)預(yù)先加入40 µL樣本稀釋液,在對(duì)照孔內(nèi)分別加入50 µL陰性對(duì)照血清(NC)和50 µL陽性對(duì)照血清(PC)。然后在樣品孔中加入10 µL待檢血清,樣品稀釋比例為1:5。
微孔板加樣位置示例圖
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
A | NC | |||||||||||
B | NC | |||||||||||
C | PC | |||||||||||
D | PC | |||||||||||
E | S1 | |||||||||||
F | S2 | |||||||||||
G | S3 | |||||||||||
H | S4 |
2.加酶:每孔加入50 μL酶標(biāo)記物,輕輕混勻。樣品稀釋變?yōu)?/span>1:10,即反應(yīng)體系為100 µL/孔。
3.溫育:輕輕振蕩混勻(勿溢出),蓋上封板膜,37℃孵育30 min。。
4.洗板:棄去孔中液體,每孔加300 μL洗滌液,洗滌3次,最后一次洗滌后將酶標(biāo)板在吸水紙上輕輕拍干,嚴(yán)禁各步驟之間孔板出現(xiàn)干燥情況。
5.顯色:每孔加入100 μL顯色劑,輕輕混勻,蓋上封板膜,37℃避光孵育10 min。
6.終止:每孔加入50 μL終止液,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。
7.讀數(shù):使用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的光密度值(OD值)。
【結(jié)果判定】
1.實(shí)驗(yàn)成立條件:陰性對(duì)照平均OD值>0.6,陽性對(duì)照平均OD值<0.4。
2.計(jì)算方法:ODNC均值=(ODNC1+ODNC2)/2
3.樣品S/N值計(jì)算公式:S/N=樣本OD值/ ODNC均值
4.判定標(biāo)準(zhǔn):S/N≤0.5,判為陽性;S/N>0.5,判為陰性。
【注意事項(xiàng)】
1.儲(chǔ)存條件為2~8℃。試劑盒開啟前應(yīng)確認(rèn)其批號(hào)及有效期。
2.過期產(chǎn)品請(qǐng)勿使用,不同批號(hào)的試劑盒組分禁止混用。
3.試劑盒使用前各組分試劑均須恢復(fù)至室溫(25±3℃),使用后放置2~8℃保存。
4.應(yīng)注意避免向試劑盒中引入污染。移液器吸頭必須一次一換。
5.實(shí)驗(yàn)所用儀器(如:微量移液器、恒濕培養(yǎng)箱、ELISA洗板機(jī)、酶標(biāo)儀)需要在使用前進(jìn)行功能檢查,確保其可用性、準(zhǔn)確性。
6.所有試劑嚴(yán)禁接觸皮膚和粘膜。檢測(cè)結(jié)束后所用耗材需按國家規(guī)定進(jìn)行無害化處理。
7.未用的微孔板條可裝入密封袋中2~8℃保存。
8.試劑盒中各組分容器只針對(duì)該組分使用,不可二次利用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
2~8℃保存,有效期12個(gè)月。
【規(guī)格】96T×2/盒
【生產(chǎn)日期及批號(hào)】
詳見包裝袋和外包裝盒。
僅供獸醫(yī)診斷使用
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